蘇州千舍生物教你如何培養細胞之細胞消化

細胞培養，尤其是細胞系的培養，就細胞消化而言，多做、善于總結，就可以把細胞養的越來越好。

絕大部分細胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可：

吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞（絕大部分1min不到）。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞，連續這樣傳代，對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。

怎樣算是消化好了呢？

不需要把細胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經可以了。

一般能移動了，說明細胞與培養基質材料的附著已經消失了，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現很廣的離散分布）。這個時候應該停止消化，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。

細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養的細胞，尤其是腫瘤細胞的一個特性，你可以嘗試，準備100%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。

一些懸浮培養細胞也是如此，容易聚集，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液。細胞只要能從基質上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次（一般10次即可），成小規模聚集（10個細胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間，等待單細胞懸液出現。

比較難消化的細胞：

潤洗方法5min還不能消化，以結腸癌細胞為例，比如HCT15、LS411和KM12細胞，胰酶消化，一般10 cm 培養皿，一次多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細胞，一般不超過5min，即可見細胞成片移動，就應該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候，比如tsDC細胞，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

常規的細胞實驗，受消化影響不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細胞例外）。但少數實驗，比如病毒包裝，對細胞代數，對細胞狀態要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對細胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數一多，細胞包裝能力就會逐漸下降。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細胞外基質相關酶的活性，來使得細胞脫離基質附著表面，但不切割任何蛋白。

EDTA的作用：

許多人不用胰酶，只用EDTA，或者用胰酶/EDTA聯合作用。這里要明白，胰酶切割細胞外基質的一些負責粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于整聯蛋白的活性，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細胞，添加多一些EDTA，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話），而應該想其它辦法。

PBS洗滌：

消化之前用PBS洗滌，是常見的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細胞，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS，因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化，不需要配制不含Ca，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細胞房、培養箱&水盤、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細菌、真菌等微生物的清除，每次操作完都整理好細胞房，帶好手套、口罩、鞋套，防止人為因素污染。一旦發現污染，及時處理。

Hyclone胎牛血清SH30084.03

Hyclone胎牛血清SH30406.02

Hyclone胎牛血清SH30406.05

Hyclone胎牛血清SH30396.03

Hyclone胎牛血清SH30070.03

特級胎牛血清 SH30070.03E

Hyclone胎牛血清 SH30370.03

活性炭/葡聚糖胎牛血清 SH30068.03

活性炭/葡聚糖處理胎牛血清，熱滅活 SH30068.03HI

馬血清SH30074.03

烏拉圭胎牛血清 SV30087. 03

Hyclone胎牛血清SH30071.03

Hyclone胎牛血清SV30160.03

BOVOGEN胎牛血清 SFBS

BOVOGEN新生牛血清 SNCS

PAA 普通胎牛血清FBS A15-101

PAA 優等胎牛血清FBS A15-151

BI優等胎牛血清 04-001-1ACS

BI ES級別胎牛血清 04-002-1A

BI 間充質胎牛血清 04-400-1A

Corning胎牛血清 35-076-CV

PAN胎牛血清FBS P30-3302

PAN胎牛血清FBS ST30-3302

PAN ES級別胎牛血清 ST30-2602

PAN胎牛血清Plus ST30-3302P

NTC優等胎牛血清 SFBE

Gemini優等胎牛血清 900-108

Gemini特級胎牛血清 100-500

Gemini科研用人AB血清100-512

TCB胎牛血清 101ZC

Sigma 特級胎牛血清F2442

Sigma正常人AB血清 H4522

SBI 無外泌體血清 EXO-FBS-50A-1

胎牛血清盒裝A31608-02、馬血清16050-122

雙抗15140-122、SV30010

胰酶 25200-056、SH30042.01

GIBCO 胰酶 25200-072

MCF7/Taxol人乳腺癌紫杉醇耐藥株

HCT8/5-fu 人回腸直腸腺癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

LOVO/5-FU 人結腸癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

HCT116/L人結腸癌奧沙利鉑耐藥細胞

HL60/ADR人早幼粒急性白血病細胞耐阿霉素株

PC9GR(PC9R)人肺癌細胞耐吉非替尼

LOVO/ADR人結腸癌細胞阿霉素耐藥株

HNE1/DDP人鼻咽癌細胞順鉑耐藥株

SGC7901/5-fu人胃癌細胞五氟尿嘧啶耐藥株

A549/DDP人肺癌細胞順鉑耐藥株

MCF-7/DDP人乳腺癌細胞順鉑耐藥株

A549/ADR人肺癌細胞阿霉素耐藥株

SGC7901/DDP人胃癌細胞順鉑耐藥株

SKOV3/DDP人卵巢癌細胞順鉑耐藥株

HELA/DDP人宮頸癌耐順鉑細胞株

NCI-H1650 人肺支氣管癌細胞

RT4 人膀胱移行細胞乳頭瘤

SK-N-MC 人神經上皮瘤細胞

SK-N-SH 人神經母細胞瘤細胞

SW982 人滑膜肉瘤細胞

T98G 人膠質母細胞瘤

U251MG(KO) 人類星形膠質細胞瘤細胞

U266 人骨髓瘤細胞

VCAP 人前列腺癌細胞

hTERT-HPNE 人胰腺導管細胞

ES-2 人卵巢透明細胞癌細胞

NCI-H1650人非小細胞肺癌細胞

H460 人大細胞肺癌細胞

HACAT 人永生化角質形成細胞

HCT116 人結腸癌細胞

HEK293 人胚腎細胞

HEPG2 人肝癌細胞

HGC27 人胃癌細胞(未分化)

HT-29 人結腸癌細胞

HUVEC 人臍靜脈內皮細胞

KYSE150人食道癌細胞

L02(HL7702)人正常肝細胞  

LOVO 人結腸癌細胞

MCF-10A人正常乳腺上皮細胞

MCF7人乳腺癌細胞

LX-2 人肝星狀細胞

MDA-MB-468人乳腺癌細胞