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千舍--熒光標記的選擇指南

更新時間:2022-08-18點擊次數(shù):1163


對于流式檢測最初的一步就是選擇何種方法,通常是何種熒光物質(zhì)標記的抗體。廠家根據(jù)需要開發(fā)了各種熒光標記的抗體,進行選擇時首先要滿足的就是所選擇的抗體必須在流式上能夠檢測,各單位買的流式儀功能不*一致,首先要和檢測方進行聯(lián)系,看能否檢測。在附表里我將常用的熒光標記物質(zhì)的激發(fā)波長和檢測波長給出,可以參考。有幾個原則一起說一下:

1、流式檢測時*熒光物質(zhì)直接標記的抗體,如果沒有直接標記的抗體,用間接發(fā),即二抗上標記熒光分子同樣可以。不過這增加了處理的難度,處理步驟增多,往往會不同程度影響檢測結(jié)果。

2、廠家推出的抗體有一些明確寫明適合流式檢測,而另一些則表明適合免疫組化、western等,選擇前者,可以保質(zhì)保量,但是后者并不是不可以用,一般來說如果沒有明確的表明適合流式檢測的抗體,采用后者也是可以的,不過要注意其檢測結(jié)果不一定非常理想。

3、單抗和多抗均可應(yīng)用。

4、綠色熒光蛋白等本身有熒光的物質(zhì)在檢測時會占據(jù)一個熒光通道,我也曾碰到幾次有人將轉(zhuǎn)了綠色熒光蛋白的細胞再采用FITC標記的抗體來檢測目的蛋白(據(jù)說還有人用此方法得出了滿意的結(jié)果!),豈不知綠色熒光蛋白和FITC是一個熒光通道,更本不能一起檢測。

5、如果是檢測淋巴細胞這類細胞,經(jīng)常用到多種抗體同時標記,選擇時切勿選錯。我自己比較傾向于多重標記,因為這樣可以減少抗體和細胞用量,特別是對于小鼠的血標本,經(jīng)常采到的血量微少,采用多重標記更有利。當然這要求流式操作者有較高的水平,注意調(diào)節(jié)流式儀的各種參數(shù)。

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