血清使用需要注意的問(wèn)題

（一）被誤判為污染的“小黑點(diǎn)"

經(jīng)過(guò)熱處理的血清，往往沉淀物會(huì)增多，而這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是污染物，常常會(huì)讓研究者誤以為血清遭到污染。然而，把血清放在37℃環(huán)境中，又會(huì)使此沉淀物進(jìn)一步增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。

我們的經(jīng)驗(yàn)是拿到鏡下去觀察是否為細(xì)菌狀或真菌狀形態(tài)。還有就是做無(wú)菌培養(yǎng)，取一點(diǎn)血清在培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)幾天，觀察沉淀物是否有變化。一般情況下，這些沉淀物并不會(huì)影響血清的正常使用，Lab里往往用0.22μM的濾膜過(guò)濾一下就繼續(xù)使用了。

（二）解凍血清

解凍血清時(shí)，請(qǐng)遵循推薦的分步解凍方法（-20℃→4℃→室溫）。實(shí)驗(yàn)表明，如果血清解凍溫度過(guò)高（如-20℃→37℃），很容易產(chǎn)生沉淀。解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)搖勻，使溫度和成分均勻，減少沉淀的發(fā)生。請(qǐng)不要長(zhǎng)時(shí)間將血清放置在37℃環(huán)境中，如果放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，血清會(huì)變得混濁，血清中的許多不穩(wěn)定成分會(huì)受到破壞，從而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活很容易引起沉淀物的增加，我們認(rèn)為這一步是不必要的。如需對(duì)血清進(jìn)行熱滅活，請(qǐng)遵循56℃、30min原則，隨時(shí)搖勻。如果溫度過(guò)高、時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或搖晃不均勻，沉淀物就會(huì)增加。

血清中出現(xiàn)沉淀物的原因有很多，但最常見(jiàn)的是血清中脂蛋白的變性，解凍后血清中還會(huì)存在纖維蛋白（形成凝塊的蛋白質(zhì)之一），這也是產(chǎn)生沉淀物的主要原因之一。然而，這些絮狀沉淀物雖然并不影響血清本身的質(zhì)量，但有可能會(huì)被誤判為污染物。如果要去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝在無(wú)菌離心管中，以1200rpm的速度離心，然后將上清液加入培養(yǎng)基中進(jìn)行過(guò)濾。

（三）保存血清

避免血清出現(xiàn)非污染性沉淀物的最好方法就是減少血清反復(fù)凍融的次數(shù)，所以血清少量分裝凍存是一個(gè)好方法。建議血清保存在-20～-5℃之間。如果以4℃保存，不要超過(guò)一個(gè)月。如果一次不能用完一瓶，建議將血清分裝到無(wú)菌離心管中，然后再凍存。

中文名 英文名稱(chēng) 貨號(hào) 規(guī)格

WinSera® 優(yōu)級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum FBS500-WS-002 500ml

WinSera® 特級(jí)胎牛血清 Fetal Bovine Serum FBS500-WP-002 500ml

WinSera®干細(xì)胞專(zhuān)用胎牛血清  Stem cells Qualified FBS500-WE-002(ES) 500ml

WinSera® 無(wú)外泌體血清  Exosome-depleted FBS FBS050-EXO 50ml

WinSera® AB血清 Human Serum AB HU050-S-011 100ml

WinSera®熱滅活胎牛血清  Heat Inactivated FBS FBS500-WH-002 500ml

WinSera®碳吸附胎牛血清  Dextran Stripped FBS FBS500-WCS-002 500ml

WinSera®透析胎牛血清  Fetal Bovine Serum, Dialyzed FBS500-WDF-002 500ml

WinSera®超低IGg胎牛血清  Low IgG FBS FBS500-WLG-002 500ml

WinSera®新生牛血清 NewbornCalfSerum NCS500-W-002 500ml

產(chǎn)品名稱(chēng)：優(yōu)級(jí)胎牛血清

品牌：WinSera

貨號(hào)：FBS500-WS-002

規(guī)格：500ml

適用范圍及應(yīng)用領(lǐng)域

1、疫苗的研發(fā)生產(chǎn):人用疫苗：如冠疫苗、乙肝、甲肝、狂犬病疫苗、乙腦、人用出血熱等

獸用疫苗：豬瘟疫苗、禽感疫苗、獸用狂犬病疫苗等

2、生物醫(yī)藥及細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域:細(xì)胞培養(yǎng)；

抗原抗體的研發(fā)生產(chǎn)等；

為細(xì)胞制備提供的環(huán)境及增殖營(yíng)養(yǎng)；

3、科研領(lǐng)域:高校科研

合同研究組織（科研外包CRO模式）醫(yī)院科研及檢驗(yàn)用血清

診斷試劑的研發(fā)及生產(chǎn)

FBS500-WS-002胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞種類(lèi)

1、常用細(xì)胞：VERA、293、293T、SF9、CHO細(xì)胞

2、神經(jīng)細(xì)胞：PC12、SH-SY5Y

3、原代細(xì)胞：牛/豬睪丸原代細(xì)胞、原代 腫瘤細(xì)胞、大/小鼠原代神經(jīng)細(xì)胞、原代腫瘤細(xì)胞

4、腫瘤細(xì)胞:HELA、HEPG2、A549二倍體細(xì)胞:MRC-5、KMB-17、2BS、SV-1

5、免疫細(xì)胞培養(yǎng)T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、DC細(xì)胞干細(xì)胞培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞單抗制備B細(xì)胞、骨髓瘤(SP0、SP2)、融合細(xì)胞(雜交瘤細(xì)胞等)

血清沉淀是污染嗎？

無(wú)論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點(diǎn)樣的磷酸鈣，都容易被誤認(rèn)為是細(xì)菌污染，但其實(shí)血清沉淀并不是污染。由于在37℃的溫度下培養(yǎng)，會(huì)加劇纖維蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產(chǎn)生，可采用空培方式驗(yàn)證污染，血清按所需比例加入無(wú)菌培養(yǎng)基中（不加雙抗），放培養(yǎng)箱中過(guò)夜，觀察空培外觀，若為澄清，則血清無(wú)污染。還可以通過(guò)將血清接種在細(xì)菌培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，觀察是否存在細(xì)菌增殖，并且進(jìn)行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。

血清沉淀會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)嗎？

血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，過(guò)于澄清的血清并不代表更高的品質(zhì)，也可能是在加工過(guò)程中提前進(jìn)行“預(yù)老化"，即反復(fù)凍融盡可能的去除纖維蛋白原的結(jié)果。

血清沉淀的多少與血清的使用效果沒(méi)有必然關(guān)系，血清沉淀并不會(huì)影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。