產(chǎn)品名稱：山羊關(guān)節(jié)軟骨細胞

細胞特性

1）來源：山羊

2）形態(tài)： 貼壁

3）含量：>1x106

4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5）規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存：可選擇干冰運輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細胞方式：（1）干冰運輸，收到后立即轉(zhuǎn)入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復(fù)蘇；（2）存活細胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長，傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時，再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照，3天內(nèi)如果發(fā)現(xiàn)污染，請及時拍照與我們聯(lián)系。

細胞用途：僅供科研使用。細胞接收后的處理：

1）收到細胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的*培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。

4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1） 準備DMEM/F12+10%FBS（推薦WinSera特級胎牛血清FBS500-WP-002）。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二． 細胞處理：

1） 凍存細胞的復(fù)蘇：：

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL*培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，*培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2） 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3. 輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例；

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10⁶~1×10⁷個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復(fù)蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉(zhuǎn)化成氣相可能導(dǎo)致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產(chǎn)生飛揚的碎屑造成人員傷害。

HEK細胞是最早公布的Ad5-轉(zhuǎn)化的人類細胞系。HEK293細胞是人腎上皮細胞系，有多種衍生株，比如HEK293、HEK293A、HEK293T/17等都是來源于人胚胎腎細胞，其極少表達細胞外配體所需的內(nèi)生受體，且比較容易轉(zhuǎn)染。HEK293 細胞系是原代人胚腎細胞轉(zhuǎn)染5型腺病毒(Ad5)DNA的永生化細胞，表達腺病毒5的基因。商業(yè)化的HEK 細胞均來源于1977年Graham 轉(zhuǎn)化的HEK細胞。目前， HEK293細胞系已經(jīng)成為一個常用的表達目的蛋白質(zhì)的細胞株。

HEK293細胞系及其衍生物廣泛用于病毒包裝的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和蛋白質(zhì)相互作用研究，以及快速小規(guī)模蛋白質(zhì)表達和生物制藥生產(chǎn)。最初的293細胞是1973年通過剪切5型腺病毒DNA轉(zhuǎn)化從一個流產(chǎn)的親子關(guān)系不明的人類胚胎的腎臟中獲得的。人類胚胎腎細胞起初似乎不容易轉(zhuǎn)化，經(jīng)過多次嘗試，僅在分離出一個轉(zhuǎn)化克隆幾個月后，細胞就開始生長，該細胞系稱為HEK293或293細胞(ATCC編號CRL-1573)。已知有一個4kbp的腺病毒基因組片段整合在19號染色體上編碼E1A/E1B蛋白，干擾細胞周期調(diào)控途徑，抑制細胞凋亡。細胞遺傳學(xué)分析證實HEK293系為亞三倍體。對HEK293系進行了多重熒光原位雜交分析發(fā)現(xiàn)每個克隆中也可見多種核型，幾乎所有的細胞都存在相對于人類參考基因組的染色體改變。

山羊關(guān)節(jié)軟骨細胞

人胚腎細胞 HEK-293（293） MEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人胚腎細胞 HEK-293A DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁+懸浮生長

人高轉(zhuǎn)移鼻咽癌細胞系 5-8F  1640+10%FBS+1%P/S    貼壁生長

人鼻咽癌細胞 C666-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

人鼻咽癌細胞 NPC/HK-1 1640+10%FBS +1%P/S 貼壁生長

豬鼻甲黏膜成纖維細胞 PT-K75 DMEM+10%FBS+1%P/S 貼壁生長

人卵巢癌細胞 A2780 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S   

人卵巢癌細胞+GFP A2780+GFP 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%P/S  

人卵巢腺癌細胞 CAOV-3 DMEM(含NaHCO3 1.5g / L)+10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞 CoC1  1640+10%FBS+1%P/S  

人卵巢透明細胞癌細胞 ES-2 McCOY's 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞 HEY DMEM+10%FBS+1%P/S  

人卵巢癌細胞 HEY A8 DMEM+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細胞 HO-8910PM 1640+10%FBS+1%P/S

人正常卵巢上皮細胞系 IOSE-80（IOSE80;NFHIOSE-80;IOSE80UBC;IOSE-Van; IOSE-VAN） 1640+10%FBS+1%P/S

人卵巢顆粒細胞瘤細胞 KGN D/F12+10%FBS+1%P/S

人卵巢腺癌細胞 OVCAR-3 1640(含NaHCO3 1.5g/L)+20%FBS+1%P/S + 0.01mg/ml牛胰島素

人卵巢癌細胞 SK-OV-3 Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

人卵巢癌細胞熒光素酶標記 SK-OV-3+LUC Mccoy`s 5A +10%FBS+1%P/S

小鼠卵巢上皮癌細胞 ID8 DMEM+10%FBS+1%P/S  

倉鼠卵巢細胞 CHO DMEM+10%FBS+1%P/S

倉鼠卵巢細胞,二氫葉酸還原酶缺陷 CHO/dhFr- IMDM+10%FBS+P/S1%+0.05mM次嘌呤+0.016mM胸腺嘧啶+100nM氨甲喋呤。

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1 F12K+10%FBS+1%P/S

中國倉鼠卵巢細胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸浮） CHO GROW CD2培養(yǎng)基+1%L-谷氨酰胺+1%P/S

中國倉鼠卵巢細胞 CTLA4 IG-24 DMEM+10%FBS+0.2mM脯氨酸+0.001mM氨甲蝶呤+1%P/S

倉鼠卵巢細胞 LEC-1 MEMα+10%FBS+1%P/S

人高轉(zhuǎn)移肺癌細胞 95-D  1640+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細胞 A549  F12K+10%FBS+1%P/S   

 人肺癌細胞+RFP A549+RFP F12K+10%FBS+1%P/S

 人肺癌細胞熒光素酶標記 A549+luc F12K+10%FBS+1%P/S

人肺癌細胞 Calu-1 MCCOY'S 5A+10%FBS+1%P/S  

人肺癌細胞 DMS 53 Waymouth's MB 752/1 medium (Invitrogen, 11220-035)+10%FBS+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 HCC827 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞熒光素酶標記 HCC827+LUC 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H1299 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%（10mM）HEPES +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H1437 1640+10%FBS+1%丙酮酸鈉+1%hepes+1%PS

人經(jīng)典小細胞肺癌細胞 NCI-h1688 1640+20% FBS+1%P/S 細胞漲的慢2-3周發(fā)貨

人肺癌細胞 NCI-H1703 1640+10% FBS+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H1944 1640+10%FBS++1%PS

人肺癌細胞 NCI-H2126 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺 +1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 NCI-H2228 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細胞 NCI-H23 1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人肺癌細胞(淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 1640+10%FBS+1%P/S

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H358 1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌細胞 NCI-H446 1640+10%FBS+1%PS

人大細胞肺癌細胞 NCI-H460 [H460]  1640+10%FBS+1%P/S+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉

人非小細胞肺癌細胞 NCI-H524  1640+10%FBS+1%P/S

人大細胞肺癌細胞 NCI-H661[h661]  1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌細胞 NCI-H82 1640+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1%P/S

人肺癌細胞 pc-9 1640+10%FBS+1%P/S

人小細胞肺癌 SBC-2  1640+10%FBS+1%P/S   

人小細胞肺癌細胞 SHP-77 1640+10FBS+1%L-谷氨酰胺+1%丙酮酸鈉+1% PS

小鼠肺癌細胞 LLC DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠肺癌細胞熒光素酶標記 LLC+LUC DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細胞瘤細胞 D283 Med  MEM+10%FBS+1%P/S

人腦髓母細胞瘤細胞 D341 Med MEM+1%丙酮酸鈉+1%NEAA+10%FBS+1%P/S  

永生化人腦微血管內(nèi)皮細胞 HCMEC/D3 內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系（PriMed-iCell-002）

人腦膠質(zhì)瘤細胞 HS683 DMEM+15%FBS+1%P/S  

人腦膠質(zhì)細胞瘤細胞 KNS-89 DMEM +10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 SNB-19 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦膠質(zhì)瘤 TJ905 DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U118MG（U-118MG） DMEM+10%FBS+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤 U87MG MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

人腦星形膠質(zhì)母細胞瘤+RFP U87MG+RFP MEM+10%FBS+1%L-谷氨酰胺+1%NEAA+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)膠質(zhì)母細胞 G422 DMEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞株 bEnd.3 DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S  

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞 neuro-2a MEM+10%FBS+1%P/S

小鼠腦神經(jīng)瘤細胞熒光素酶標記 neuro-2a+luc MEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞 C6 F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦膠質(zhì)瘤細胞綠色熒光標記 C6+LUC F12K +2.5%FBS+15%HS（馬血清）+1%P/S

大鼠腦星形膠質(zhì)細胞 CTX DMEM+10%FBS+1%P/S  

大鼠腦I型星形膠質(zhì)細胞 CTX-TNA2 DMEM+10%FBS+1%P/S

大鼠腦間質(zhì)細胞 DI TNC1 DMEM+10%FBS+1%P/S